برنامه زمان بندي كاركاه الكترونيكي آموزشي تخليص پروتئينها

 

 

 

1-1- مقدمه

1-2- ويژگي هاي يک " فرآيند عمليات پايين دستي " بهينه

1-2-1- ورود بهويژگي هاي يک بازار در اولين زمان ممكن :

1-2-2- كيفيت بالا

1-2-2-1- درجة خلوص بالا

1-2-2-2- فعاليت بالا

1-2-2-3- ثبات بالاي فرايند طراحي شده از يك بچ به بچ ديگر

1-2-3- هزينة پائين :

1-3- نقطه شروع

1-4- مراحل توسعة " فرآيند عمليات پايين دستي"

1-4-1- ويژگي ها و الزامات فاز تحقيق

1-4-2- ويژگي ها و الزامات فاز توسعه

   1-4-3- ويژگي‌ها و الزامات فاز توليد

1-5- جمع بندي نهايي

 

2-1- مقدمه

2-2- پارامترهاي مؤثر ب2ر خصوصيات كلي "فرايند عمليات  پايين دستي"

2-2-1- درصد بيان  (% expression)

2-2-2- درجه خلوص (% Purity)

2-2-3- بازيابي (% Recovery)

2-2-4- بازيابي محصول (Yield)

2-3- پارامترهای دخيل در مراحل فرايند پالايش

2-3-1- متعادل سازي (Equilibration)

2-3-2- اِعمال نمونه (Sample Application)

2-3-3- شستشوي رزين كروماتوگرافي (Washing)

2-3-4- خارج سازي (Elution) يا مرحله دفع (Desorption)

2-3-5- بازيابي (Regeneration)

2-3-6- تميزكردن درمحل (Cleaning-In-Place)

2-3-7- سترون كردن (Sanitization)

2-3-8- نگهداري (Storage)

2-4- پارامترهاي عمليات واحدي

2-4-1- بازماندن )Retention)

2-4-2- ظرفيت (Capacity)

2-4-3- بازدهي (Efficiency)

2-4-4- انتخابگري (Selectivity)

2-4-5- قدرت جداسازي (Resolution)

 

3-1- مقدمه                                                                                                      First chat     2-3 P.M.

3-2- انواع محصولات پروتئيني باتوجه به نوع منبع اولية توليد كننده

3-3- عمليات پيش‌پالايش محصولات برون سلولي

3-3-1- جداسازي سلولي

3-3-1-1- سانتريفيوژ

3-3-1-2- ميكروفيلتراسيون به روش فيلتراسيون با جريان متقاطع:

3-3-2- كاهش حجم

3-3-2-1- اولترافيلتراسيون

3-3-2-2- روشهاي جذب

3-3-2-3- رسوب‌دهي

3-4- عمليات پيش‌پالايش محصولات درون سلولي

3-4-1- درو كردن و جمع‌  آوري سلول‌ها (CellHarvesting)

3-4-2- شكست سلولي

3-4-2-1- روشهاي مكانيكي

3-4-2-2- روشهاي غير مكانيكي

3-4-3- جداسازي مواد جامد

3-4-4- آماده‌سازي نمونه قبل از كروماتوگرافي

3-5- نتيجه گيري

 

4-1-   Second chat     2-3 P.M.                                                                                                             مقدمه

4-2- سيستم‌هاي كروماتوگرافي مايع

4-3- كروماتوگرافي به روش تعويض يوني (IEC)

4-3-1- مقدمه

4-3-2- انواع كروماتوگرافي تعويض يوني باتوجه به مكانيزم عمل

            4-3-2-1- رزين تبادل كاتيون باقدرت جذب بالا

            4-3-2-2- رزين تبادل كاتيون با قدرت جذب پايين

            4-3-2-3- رزين تبادل آنيون با قدرت جذب بالا

            4-3-2-4- رزين تبادل آنيون با قدرت جذب پايين

4-3-3- ويژگي‌هاي روش تعويض يوني

4-3-4- جايگاه كروماتوگرافي به روش تعويض يوني در فرايند تخليص

            4-3-4-1- استفاده از روش كروماتوگرافي تعويض يوني جهت تغليظ

            4-3-4-2- استفاده از روش كروماتوگرافي تعويض يوني جهت جداسازي

4-3-5- تقسيم‌بندي كروماتوگرافي تعويض يوني براساس استراتژي مرحله جذب

            4-3-5-1- كروماتوگرافي مثبت

            4-3-5-2- كروماتوگرافي منفي

4-3-6- نمونه عملي استفاده از روش كروماتوگرافي تعويض يوني

4-4-1- مقدمه

4-4-2- مكانيزم جداسازي در روش HIC و پارامترهاي موثر

            4-4-2-1- غلظت نمك

            4-4-2-2- گروه عاملي

            4-4-2-3- PH

            4-4-2-4 دما

4-4-3- ويژگي‌هاي كروماتوگرافي به روش جاذبه هيدروفوبيك

4-4-4- نمونه عملي استفاده از روش HIC در فرايند تخليص

4-5- كروماتوگرافي به روش ميل تركيبي (AC)

4-5-1- مكانيزم كروماتوگرافي ميل تركيبي

                        4-5-1-1- ماتريس يا پايه جامد پليمري

                        4-5-1-2- ليگاند

                        4-5-1-3- بازوي اتصال

                        4-5-1-4- تثبيت ليگاند بر روي ماتريس جامد و فعال‌سازي رزين

                        4-5-1-5- ويژگي ليگاند از نظر نوع جاذبه ويژه

            4-5-2- شرايط عملياتي و نكات مهم در انجام كروماتوگرافي ميل‌تركيبي

            4-5-3- كروماتوگرافي با استفاده از يون فلزي تثبيت شده (IMAC)

            4-5-4- نمونه عملي استفاده از روش AC جهت تخليص پروتئينها

4-6- كروماتوگرافي به روش فيلتراسيون ژلي (GF)

            4-6-1- مقدمه

            4-6-2- مكانيزم روش فيلتراسيون ژلي

                        4-6-2-1- ژل كروماتوگرافي

                        4-6-2-2- اندازة دانه‌هاي رزين

                        4-6-2-3- خصوصيات ستون كروماتوگرافي از نظر ارتفاع ستون و پركني

                        4-6-2-4- خصوصيات نمونه

                        4-6-2-5- شرايط عملكردي

            4-6-3- كاربرد روش فيلتراسيون ژلي در فرايند تخليص

                        4-6-3-1- جداسازي ذرات براساس اندازه ذرات

                        4-6-3-2- تعيين جرم مولكولي پروتئينها بصورت اصلي (Native) يا بقية اشكال

                        4-6-3-3- تعويض با فرونمك زدايي

            4-6-4- جايگاه روش فيلتراسيون در فرايند تخليص

 

5-1- مقدمه                                                                                                                      

5-2- روشهاي تعيين غلظت پروتئيني

5-2-1- روش جذب در طول موج UV

5-2-2- روش Bradford

5-2-3- روش Lowry

5-3- روشهاي ژل الكتروفورز

5-4- روشهاي Blotting

5-4-1- Western Blotting

 5-4-2- Dot Blotting

5-5- نتيجه گيري

 

6-1- مقدمه                                                                                            

6-2- اهميت بهينه‌سازي در كل فرايند عمليات پايين دستي

6-3- بهينه‌سازي فرايند تخليص با استفاده از روشهاي مختلف كروماتوگرافي

                        6-3-1- اندازه دانه‌هاي رزين كروماتوگرافي

                        6-3-2- برنامه خروج نمونه از ستون كروماتوگرافي

                        6-3-3- ارتفاع بستر رزين كروماتوگرافي

                        6-3-4- ميزان اعمال نمونه در ستون كروماتوگرافي

                        6-3-5- دبي جريان

6-4- نتيجه گيري

7-1- مقدمه

7-2- اصول افزايش مقياس در روشهاي كروماتوگرافي

7-3- ملاحظات مربوط به ستون كروماتوگرافي در افزايش مقياس

7-4- ملاحظات مربوط به سيستم كروماتوگرافي در افزايش مقياس

7-5- عوامل غير كروماتوگرافي در افزايش مقياس

7-6- حل نمونه عملي از مسئله افزايش مقياس